[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: جستجو :: تماس با ما ::
:: دوره 8، شماره 1 - ( فروردین-اردیبهشت 1393 1393 ) ::
جلد 8 شماره 1 صفحات 1-9 برگشت به فهرست نسخه ها
طراحی و بهینه‌سازی واکنش زنجیر‌های پلیمراز چندگانه جهت تکثیر
معصومه بزاز1، حمیده روحانی‌نژاد1، رامین فلاح‌زاده1، سید حمیدرضا خاتمی1، جلیل فلاح مهرآبادی* 1
1- دانشگاه صنعتی مالک اشتر
چکیده:   (1383 مشاهده)

زمینه و هدف: آنتی‌بادی‌‌ها در بسیاری از حوزه‌‌های تشخیص و درمان مورد استفاده قرار می‌گیرند. آنتی‌بادی‌‌های کاملاً انسانی به دلیل عدم برانگیختن پاسخ ایمنی در بدن بسیار مورد توجه قرار دارند. این مطالعه با هدف طراحی و بهینه‌سازی واکنش زنجیر‌های پلیمراز چندگانه جهت تکثیر ژن‌‌های آنتی‌بادی انسانی علیه توکسوئید کزاز انجام شد. روش بررسی: پس از خونگیری از انسان ایمن‌شده با توکسوئید کزاز و جداسازی لمفوسیت‌‌ها، RNA استخراج و cDNA ساخته شد. طی دو واکنش PCR چندگانه و با استفاده از 14 جفت پرایمر، همه تنوع ژن‌‌های ناحیه متغیر زنجیره‌‌های سبک (کاپا) و سنگین آنتی‌بادی تکثیر شد. واکنش PCR جهت اتصال قطعات VH و VL به‌صورتScFv  و واکنش  Semi Nested PCR جهت افزودن جایگاه برش آنزیم محدودالاثر به دو انتهای قطعه انجام شد. یافته‌‌ها: در انجام دو واکنش Multiplex PCR ، دو قطعه VH و VL به ترتیب به اندازه‌های bp410 و 680 تکثیر شد. با واکنشOverlap Extension PCR، دو قطعهVH  و VL به‌صورت ScFv به‌هم متصل و قطعه bp1070 به‌ دست آمد. در نتیجه انجام واکنش Semi Nested PCR، جایگاه برش به دو انتهایScFv  اضافه شد. نتیجه‌گیری: با انتخاب مجموعه پرایمر مناسب و بهینه‌سازی عوامل موثر در Multiplex PCR، می‌توان با دو واکنشMultiplex PCR  جداگانه به جای چند واکنش Uniplex، همه تنوع‌های ژن‌های آنتی‌بادی به‌ دست آمده از میان cDNA تام لمفوسیت انسانی را تکثیر و جداسازی نمود، لذا می‌توان تنها با استفاده از دو واکنش Multiplex PCR، تمامی‌ تنوع‌‌های ژنتیکی آنتی‌بادی انسانی را به‌صورت قطعات VH و VL از خون فرد ایمن‌شده با توکسوئید کزاز تکثیر کرد.

واژه‌های کلیدی: آنتی‌بادی نوترکیب، توکسوئید کزاز، واکنش زنجیر‌های پلیمراز چندگانه
متن کامل [PDF 767 kb]   (1244 دریافت)    
نوع مطالعه: مقاله پژوهشي |
دریافت: ۱۳۹۴/۱۱/۲۴ | پذیرش: ۱۳۹۴/۱۲/۴ | انتشار: ۱۳۹۴/۱۲/۴
ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA code


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Bazzaz M, Rouhaninejad H, Fallahzadeh R, Khatami S H R, Fallah Mehrabadi J. Designing and Optimizing of Multiplex Polymerase Chain Reaction for Amplification of Human Anti-Tetanus Toxoid Antibody Genes. Qom Univ Med Sci J . 2014; 8 (1) :1-9
URL: http://journal.muq.ac.ir/article-1-165-fa.html

بزاز معصومه، روحانی‌نژاد حمیده، فلاح‌زاده رامین، خاتمی سید حمیدرضا، فلاح مهرآبادی جلیل. طراحی و بهینه‌سازی واکنش زنجیر‌های پلیمراز چندگانه جهت تکثیر. مجله دانشگاه علوم پزشکی قم. 1393; 8 (1) :1-9

URL: http://journal.muq.ac.ir/article-1-165-fa.html



دوره 8، شماره 1 - ( فروردین-اردیبهشت 1393 1393 ) برگشت به فهرست نسخه ها
مجله دانشگاه علوم پزشکی قم Qom University of Medical Sciences Journal
Persian site map - English site map - Created in 0.21 seconds with 30 queries by YEKTAWEB 3735