fa زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B (BD/B روانشناسی روانشناسی مقاله پژوهشي Original Article <p dir="RTL"><strong>زمینه و هدف:</strong> سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری <em>کلستریدیوم بوتولینوم</em> ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از <span dir="LTR">A</span><em>-</em><span dir="LTR">G</span> می‌باشد. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجادشده توسط <span dir="LTR">BoNT/B</span><em>،</em> استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده از ناحیه اتصالی آن (به‌علت داشتن اپی‌توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) است. در این پژوهش بیان زیرواحد اتصالی نوروتوکسین <em>بوتولینوم تیپ </em><span dir="LTR">B</span><em>، </em>به‌منظور کاندید واکسن مورد بررسی قرار گرفت.</p> <p dir="RTL"><strong>روش بررسی:</strong> ابتدا توالی ژن ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ <span dir="LTR">&nbsp;B</span>از سایت <span dir="LTR">NCBI</span> با کد دسترسی <span dir="LTR">EF028399.1</span> گرفته شد. بعد از بهینه‌سازی کدون، ژن مورد نظر به‌صورت صناعی در داخل وکتور <span dir="LTR">pUC18</span> تهیه گردید. سپس این ژن در وکتور بیانی <span dir="LTR">pET32a(+)</span> که دارای مارکر انتخابی آمپی‌سیلین می‌باشد، زیرهمسانه‌سازی شد. جهت تأیید صحت زیرهمسانه‌سازی؛ از <span dir="LTR">PCR</span>، برش آنزیمی و تعیین توالی و برای بررسی بیان از سوش <em><span dir="LTR">E. coli</span></em><span dir="LTR"> BL21</span><span dir="LTR">(DE3)</span> استفاده گردید. صحت بیان پروتئین با الکتروفورز (تحت شرایط مختلف و روش وسترن بلات) مورد بررسی قرار گرفت.</p> <p dir="RTL"><strong>یافته‌ها: </strong>واکنش‌های <span dir="LTR">PCR</span>، برش آنزیمی را براساس سایت‌های برشی در وکتور و در نهایت، تعیین توالی تأیید کرد که ژن مورد نظر به‌طور مناسب در وکتور <span dir="LTR">pET32a(+)</span><em>، </em>همسانه‌سازی شد. بررسی بیان با استفاده از <span dir="LTR">SDS- PAGE</span> و متعاقب آن انجام وسترن بلاتینگ نشان داد پروتئین مورد نظر در سویه بیانی مذکور بیان نمی‌شود.</p> <p dir="RTL"><strong>نتیجه‌گیری:</strong> اگرچه ژن مورد نظر در داخل وکتور<span dir="LTR">pET32a(+)</span><em>، </em>به‌طور مناسب زیرهمسانه‌سازی گردید، با این حال هیچ بیان قابل‌مشاهده‌ای از ژن مورد نظر دیده نشد.</p> <p dir="RTL"></p> <p><strong><em>Background and Objectives</em></strong><strong><em>:</em></strong> Botulism syndrome is caused by <em>Clostridium botulinum</em> neurotoxin. This neurotoxin has 7 serotypes, from A to G. The best way to prevent botulism syndrome caused by BoNT/B is immunization with recombinant binding domains of BoNT/B (due to containing sufficient epitopes to stimulate the immune system). In this study, the expression of the BoNT/B binding domain as a candidate vaccine, was investigated.</p> <p></p> <p><strong><em>Methods:</em></strong> At first, the sequence of the <em>BoNT/B </em>binding domain gene was obtained from NCBI website with accession number of EF028399.1. After codon optimization, the gene was synthesized in pUC18 vector. Then, the gene was subcloned in pET32a(+) expression vector that carries an ampicillin selection marker. PCR, enzymatic digestion, and sequencing were used to confirm subcloning accuracy, and <em>E. coli </em>BL21(DE3) was used for the expression analysis. The accuracy of protein expression was evaluated by electrophoresis and western blotting.</p> <p></p> <p><strong><em>Results</em></strong><strong><em>:</em></strong> PCR reaction, enzymatic digestion, and sequencing confirmed that the gene of interest has been subcloned appropriately in the vector. The expression analysis by SDS-PAGE and subsequently western blotting, showed that the protein of interest is not expressed in the mentioned expression strain.</p> <p></p> <p><strong><em>Conclusion:</em></strong> Although the gene was successfully subcloned in <em>pET32a(+) </em>vector, no significant expression of the gene was observed.</p> <p></p><p></p> کلستریدیوم بوتولینوم؛ بررسی بیان؛ واکسن نوترکیب. Clostridium botulinum, Gene expression, Vaccines, Synthetic. 29 37 http://journal.muq.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-532&slc_lang=fa&sid=1 Majid Baradaran مجید برادران No Biology Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین‌(ع)، تهران، ایران Firouz Ebrahimi فیروز ابراهیمی febrhimi@ihu.ac.ir Yes Biology Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین‌(ع)، تهران، ایران Shahram Nazarian شهرام نظریان No Biology Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین‌(ع)، تهران، ایران Abbas Hajizade عباس حاجی‌زاده No Biology Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین‌(ع)، تهران، ایران Yousof Tarverdizadeh یوسف تاروردی‌زاده No Biology Research Center, Faculty of Basic Sciences, Imam Hossein University, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین‌(ع)، تهران، ایران