Qom University of Medical Sciences Journal
مجله دانشگاه علوم پزشکی قم
Qom Univ Med Sci J
Medical Sciences
http://journal.muq.ac.ir
1
admin
1735-7799
2008-1375
10.32598/QUSMJ
en
jalali
1399
2
1
gregorian
2020
5
1
14
2
online
1
fulltext
fa
تجزیهوتحلیلهای ساختار ثانویه RNA و qRT-PCR مرتبط با anti-CD25 CAR بیانشده در ردهی سلولی NK-92
RNA secondary structure and qRT-PCR analyses pertained to expressed anti-CD25 CAR in NK-92 cell line
ژنتیک
ژنتیک
مقاله پژوهشي
Original Article
<strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">زمینه و هدف:</span></span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> سلولهای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">T</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> تنظیمکنندهی رخنهکننده در تومور </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">(TI-Treg)</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> عملکرد مهمی را در فرار سرطان از سیستم ایمنی اجرا میکنند. در این پژوهش، نسل سوم سازهی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">CAR</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> علیه آنتیژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">CD25</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> انسانی بهعنوان نشانگر زیستی مهم سطح سلولهای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">TI-Treg</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> طراحی شده است.</span></span><br>
<strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">روش بررسی:</span></span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> ابتدا سازهی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">anti-CD25 CAR</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> طراحی شد. با استفاده از وب سرور </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">RNAfold</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">، ساختار ثانویه </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">RNA</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> ارزیابی شد. همچنین با استفاده از وکتورهای لنتی ویروسی، ردهی سلولی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">NK-92</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> ترابرد شد. سپس سطح بیان </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">RNA</span></span> <span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">anti-CD25 CAR</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> بهوسیله </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">qRT-PCR</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> در سلولهای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">NK-92</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> ترابردشده با وکتورهای انتقالی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">CAR</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> و تقلیدی و همچنین سلولهای تیمارنشده ارزیابی شد.</span></span><br>
<strong><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">یافتهها: </span></span></span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">ساختار ثانویهی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">RNA</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> پایدار بود. همچنین سطح بیان </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">RNA</span></span> <span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">anti-CD25 CAR</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> در سلولهای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">NK-92</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> ترابردشده بهوسیلهی وکتور انتقالی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">pCDH-513B-1-anti-CD25 CAR</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> بهطور معنیداری بیش از سلولهای </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">NK-92</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> ترابردشده با وکتور انتقالی تقلیدی و سلولهای تیمارنشده بود (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">P˂0.0001</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">).</span></span><br>
<strong><span style="letter-spacing:-.1pt;"><span style="color:black;"><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">نتیجهگیری: </span></span></span></span></strong><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;">مطالعه حاضر روی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">anti-CD25 CAR RNA</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> نشان داد رونوشتهای این نوع </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">CAR</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> پایدار بود و در سطح بالایی بیان شد. درواقع، این نوع </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;">CAR</span></span><span style="font-family:b zar;"><span style="font-size:12.0pt;"> میتواند در آینده همچون ابزاری برای حذف فرار سرطان از سیستم ایمنی در انواع سرطانهای جامد و مایع بیشتر بررسی شود.</span></span>
<strong>Background and Objectives: </strong>Tumor-infiltrating regulatory T (TI-Treg) cells perform the significant function in cancer immune escape. In this study, the third generation CAR construct was designed against human CD25 antigen, the significant cell surface biomarker of TI-Tregs.<br>
<strong>Methods:</strong> Initially, the construct of anti-CD25 CAR was designed. Using RNAfold web server, the RNA secondary structure was evaluated. Also, utilizing lentiviral vectors, NK-92 cell line was transduced. Afterward, the expression level of anti-CD25 CAR RNA was assessed by qRT-PCR in NK-92 cells transduced with CAR and mock transfer vectors and also untreated cells.<br>
<strong>Results:</strong> The RNA secondary structure was stable. Also, the expression level of anti-CD25 CAR RNA in transduced NK-92 cells by pCDH-513B-1-anti-CD25 CAR transfer vector was significantly higher than transduced NK-92 cells by mock transfer vector and untreated cells (p˂0.0001).<br>
<strong>Conclusion:</strong> The present study on anti-CD25 CAR RNA showed that this type of CAR transcripts were stable and expressed at high level. In fact, this type of CAR can be further studied in the future as a tool to remove the cancer immune escape in all types of solid and liquid cancers.
بیولوژی کامپیوتری, بیوانفورماتیک,انفورماتیک, qRT-PCR, anti-CD25 CAR, ترابرد, فرار تومور- ایمنی شناسی
Bioinformatic, qRT-PCR, anti-CD25 CAR, Transduction, Cancer immune escape
1
12
http://journal.muq.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1961-1&slc_lang=fa&sid=1
Moein
Dehbashi
معین
دهباشی
modehbashi110@gmail.com