fa طراحی و بهینه‌سازی واکنش زنجیر‌های پلیمراز چندگانه جهت تکثیر مقاله پژوهشي Original Article <p>زمینه و هدف: آنتی‌بادی‌‌ها در بسیاری از حوزه‌‌های تشخیص و درمان مورد استفاده قرار می‌گیرند. آنتی‌بادی‌‌های کاملاً انسانی به دلیل عدم برانگیختن پاسخ ایمنی در بدن بسیار مورد توجه قرار دارند. این مطالعه با هدف طراحی و بهینه‌سازی واکنش زنجیر‌های پلیمراز چندگانه جهت تکثیر ژن‌‌های آنتی‌بادی انسانی علیه توکسوئید کزاز انجام شد. روش بررسی: پس از خونگیری از انسان ایمن‌شده با توکسوئید کزاز و جداسازی لمفوسیت‌‌ها، RNA استخراج و cDNA ساخته شد. طی دو واکنش PCR چندگانه و با استفاده از 14 جفت پرایمر، همه تنوع ژن‌‌های ناحیه متغیر زنجیره‌‌های سبک (کاپا) و سنگین آنتی‌بادی تکثیر شد. واکنش PCR جهت اتصال قطعات VH و VL به‌صورتScFv &nbsp;و واکنش &nbsp;Semi Nested PCR جهت افزودن جایگاه برش آنزیم محدودالاثر به دو انتهای قطعه انجام شد. یافته‌‌ها: در انجام دو واکنش Multiplex PCR ، دو قطعه VH و VL به ترتیب به اندازه‌های bp410 و 680 تکثیر شد. با واکنشOverlap Extension PCR، دو قطعهVH &nbsp;و VL به‌صورت ScFv به‌هم متصل و قطعه bp1070 به‌ دست آمد. در نتیجه انجام واکنش Semi Nested PCR، جایگاه برش به دو انتهایScFv &nbsp;اضافه شد. نتیجه‌گیری: با انتخاب مجموعه پرایمر مناسب و بهینه‌سازی عوامل موثر در Multiplex PCR، می‌توان با دو واکنشMultiplex PCR &nbsp;جداگانه به جای چند واکنش Uniplex، همه تنوع‌های ژن‌های آنتی‌بادی به‌ دست آمده از میان cDNA تام لمفوسیت انسانی را تکثیر و جداسازی نمود، لذا می‌توان تنها با استفاده از دو واکنش Multiplex PCR، تمامی‌ تنوع‌‌های ژنتیکی آنتی‌بادی انسانی را به‌صورت قطعات VH و VL از خون فرد ایمن‌شده با توکسوئید کزاز تکثیر کرد.</p> <p>Background and Objectives: Antibodies are used in many areas of diagnosis and treatment. Fully human monoclonal antibodies (mAb) have attracted high attention due to not stimulating immune response in the body. This study was carried out with the purpose of designing and optimizing multiplex polymerase chain reaction for amplification human anti-tetanus toxoid antibody genes. &nbsp; Methods: After collecting blood samples from a human immunized with tetanus toxoid and lymphocyte separation, total RNA was extracted and cDNA was synthesized. all varieties of light (Kapa) and heavy chains of antibody were amplified by two separated multiplex PCR reactions using 14 pair primers. PCR was performed to link VH and VL together and make a ScFv segment, and semi nested PCR was performed to add cutting sites of restriction enzymes at the two ends of the segment. &nbsp; Results: In two multiplex PCR reactions, VH and VL segments were amplified with the length of 410 and 680 bp, respectively. After gel extraction, VH and VL were linked together as a 1070 bp ScFv segment. Restriction sites were added to the two ends of ScFv. &nbsp; Conclusion: By selection of an appropriate primer set and optimization of effective factors of multiplex PCR, all varieties of antibody genes derived from total human lymphocyte cDNA could be amplified and extracted using two multiplex PCR reactions instead of several uniplex ones. Therefore, using only two Multiplex PCR reactions, all genetic varieties of human antibody could be amplified as VH and VL segments from the blood of a subject immunized with tetanus toxoid.</p> آنتی‌بادی نوترکیب, توکسوئید کزاز, واکنش زنجیر‌های پلیمراز چندگانه, Recombinant Antibody,Tetanus Toxoid,Multiplex Polymerase Chain Reaction. 1 9 http://journal.muq.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-140&slc_lang=fa&sid=1 masoumeh Bazzaz معصومه بزاز No Malek-Ashtar University of Technology دانشگاه صنعتی مالک اشتر Hamideh Rouhaninejad حمیده روحانی‌نژاد No Malek-Ashtar University of Technology دانشگاه صنعتی مالک اشتر Ramin Fallahzadeh رامین فلاح‌زاده No Malek-Ashtar University of Technology دانشگاه صنعتی مالک اشتر Seyed Hamid Reza Khatami سید حمیدرضا خاتمی No Malek-Ashtar University of Technology دانشگاه صنعتی مالک اشتر Jalil Fallah Mehrabadi جلیل فلاح مهرآبادی Yes Malek-Ashtar University of Technology دانشگاه صنعتی مالک اشتر