دوره 10، شماره 6 - ( شهریور 1395 )                   جلد 10 شماره 6 صفحات 23-13 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print

Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Zavvary M, Ebrahimi F, Nazarian S, Hajizadeh A, Tarverdizadeh Y. Subcloning and Assessment of the Expression of Synthetic Gene of Botulinum Neurotoxin Type A Binding Domain (BD/A). Qom Univ Med Sci J 2016; 10 (6) :13-23
URL: http://journal.muq.ac.ir/article-1-1089-fa.html
زواری مجید، ابراهیمی فیروز، نظریان شهرام، حاجی زاده عباس، تاروردی‌زاده یوسف. زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BD/A). مجله دانشگاه علوم پزشکی قم. 1395; 10 (6) :13-23

URL: http://journal.muq.ac.ir/article-1-1089-fa.html

زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BD/A)
مجید زواری1 ، فیروز ابراهیمی* 2، شهرام نظریان1 ، عباس حاجی زاده1 ، یوسف تاروردی‌زاده1
1- مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران
2- مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران ، febrhimi@ihu.ac.ir
چکیده:   (6283 مشاهده)

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از A-G می‌باشد. بهترین روش برای پیشگیری از سندرم حاصل از نوروتوکسین بوتولینوم (BoNT)، استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده از ناحیه اتصالی آن (به‌علت داشتن اپی‌توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) می‌باشد. در این مطالعه ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BoNT/A) بررسی گردید

روش بررسی: در ابتدا ژن ناحیه BoNT/A از GenBank با شماره دسترسی CP000727.1 تهیه و براساس ترجیح کدونی E. coli، بهینه‌سازی کدون انجام شد. سپس در پلاسمید pET28a، سنتز و بعد از آن در پلاسمید بیانی pGEX-4T-1، زیرهمسانه‌سازی شد. زیرهمسانه‌سازی با استفاده از روش PCR با آنزیم Pfu DNA polymerase و سپس برش دوگانه با آنزیم‌های XmaI و XhoI انجام گرفت. از سویه E. coli BL21 به‌عنوان میزبان برای بیان استفاده شد. مارکر انتخابی برای pGEX-4T-1، آمپی‌سیلین بود.

یافته‌ها: روش‌های PCR و برش محدودکننده با آنزیم‌های ذکرشده، زیرهمسانه‌سازی را تأیید کردند. بررسی بیان با استفاده از روش‌های SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ (با استفاده از آنتی‌بادی اسبی ضدBoNT/A)، سپس کروماتوگرافی تمایلی گلوتاتیون انجام گرفت. با اینکه زیرهمسانه‌سازی با موفقیت انجام شد، ولی با به‌کارگرفتن روش‌های ذکرشده، هیچ‌گونه بیان پروتئین مشاهده نشد.

نتیجه‌گیری: براساس نتایج این مطالعه، به‌نظر می‌رسد باید میزبان‌های دیگری مانند میزبان‌های یوکاریوتی برای بیان نوترکیب ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A مورد استفاده قرار گیرند.

واژه‌های کلیدی: کلستریدیوم بوتولینوم تیپ A، ناحیه اتصالی، زیرهمسانه‌سازی، بیان ژن، واکسن نوترکیب
متن کامل [PDF 569 kb]   (1620 دریافت)    
نوع مطالعه: مقاله پژوهشي |
دریافت: 1395/5/25 | پذیرش: 1395/5/25 | انتشار: 1395/5/25
ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA
ارسال پیام به نویسنده مسئول

بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.

کلیه حقوق این وب سایت متعلق به مجله دانشگاه علوم پزشکی قم می باشد.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق
© 2025 CC BY-NC 4.0 | Qom University of Medical Sciences Journal

Designed & Developed by : Yektaweb